28°C ରେ 25 ଦିନର ସ୍ଥିର ଇନକ୍ୟୁବେସନ ପରେ, *Pleurotus ostreatus* NRC620 ରୁ ଲାକେସ୍ କବକ କଲଚର ମାଧ୍ୟମରେ ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦେଖାଇଲା। ଏହି ଏନଜାଇମର ସର୍ବୋତ୍ତମ pH ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ମୂଲ୍ୟ ଯଥାକ୍ରମେ 3.0 ଏବଂ 70°C ଥିଲା। 40°C ଏବଂ 50°C ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ ପରେ, ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯଥାକ୍ରମେ 68.33% ଏବଂ 59.61% ବଜାୟ ରଖିଲା। ସାଇଟ୍ରେଟ୍-ଫସଫେଟ୍ ବଫର (pH 7.0) ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ ପରେ, ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ 100% ରେ ରହିଲା। 10 mM MgSO₄ ଏବଂ CuSO₄ ଯୋଗ କରିବା ଦ୍ଵାରା ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାୟ 21% ଏବଂ 35% ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା, ଯେତେବେଳେ NaCl, MnCl₂, KCl, ଏବଂ CaCl₂ ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା। ABTS କୁ ଏକ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase ର ଗତିଜ ପାରାମିଟର (Km ଏବଂ Vmax) ଯଥାକ୍ରମେ 1.99 mM ଏବଂ 16,217 μmol min−1 L−1 ଥିଲା। ଆପଲ୍ ରସ ନମୁନାର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ଚିକିତ୍ସା pH ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଉଭୟକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, ଏବଂ ଏହି ହ୍ରାସ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟ ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ସହସମ୍ବନ୍ଧିତ ଥିଲା। ଆପଲ୍ ରସ ରସରେ ମୋଟ ଫେନୋଲିକ୍ ପରିମାଣରେ ସାମାନ୍ୟ ହ୍ରାସ ଘଟିଲା, କିନ୍ତୁ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ କୌଣସି ହ୍ରାସ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା।
ସାମ୍ପ୍ରତିକ ବର୍ଷଗୁଡ଼ିକରେ, ଗବେଷକମାନେ ଖାଦ୍ୟ ଶିଳ୍ପରେ ସବୁଜ ଜୈବ ପ୍ରଯୁକ୍ତିର ପ୍ରୟୋଗ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଛନ୍ତି। ଲାକେସ୍ ହେଉଛି ଖାଦ୍ୟ ଶିଳ୍ପରେ ସବୁଠାରୁ ଉପଯୋଗୀ ଏନଜାଇମ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ, ଯାହା ରସ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ, ବେକିଂ, ମଦ ସ୍ଥିରୀକରଣ ଏବଂ ଖାଦ୍ୟ ଉତ୍ପାଦର ଅର୍ଗାନୋଲେପ୍ଟିକ୍ ଗୁଣବତ୍ତା ଉନ୍ନତ କରିବା ଭଳି କ୍ଷେତ୍ରରେ ପ୍ରୟୋଗ ଖୋଜୁଛି।1ଅନେକ ଉଚ୍ଚ ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ସୂକ୍ଷ୍ମଜୀବ ଲାକେସ୍ କ୍ଷରଣ କରନ୍ତି,2ଏବଂ ଡ୍ୟୁଟେରୋମାଇସେଟ୍ସ, ଆସ୍କୋମାଇସେଟ୍ସ ଏବଂ ବାସିଡିଓମାଇସେଟ୍ସ ଭଳି କବକ ମଧ୍ୟ ଲାକେସ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବେ।3ଲାକେସ୍ (EC 1.10.3.2) ହେଉଛି ଏକ ନୀଳ ଅକ୍ସିଡେଜ୍ ଯାହା ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ତମ୍ବା ପରମାଣୁ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି ଆଣବିକ ଅମ୍ଳଜାନକୁ ପାଣିରେ ହ୍ରାସ କରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ବିଭିନ୍ନ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ଏବଂ ସୁଗନ୍ଧିତ ଆମାଇନ୍ ଅକ୍ସିଡାଇଜ୍ ହୁଏ। ଫଳ ଏବଂ ପନିପରିବା ରସ ଉତ୍ପାଦନ ସମୟରେ, ଏଞ୍ଜାଇମାଟିକ୍ ଏବଂ ଅଣଏଞ୍ଜାଇମାଟିକ୍ ବ୍ରାଉନିଂ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସମସ୍ୟା।4ଯେହେତୁ ଏହି ପଦାର୍ଥଗୁଡ଼ିକ ରସର ରଙ୍ଗ, ସ୍ୱାଦ ଏବଂ ସୁଗନ୍ଧକୁ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବିତ କରନ୍ତି, ସେଗୁଡ଼ିକୁ ବାହାର କରିଦେବା ଆବଶ୍ୟକ।5
ସମସ୍ତ ଫଳ ମଧ୍ୟରୁ, ସାରା ବିଶ୍ୱ ଏବଂ ୟୁରୋପୀୟ ସଂଘରେ ଆପଲ୍ ସର୍ବାଧିକ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ୨୦୧୯ ମସିହାରେ, ଆପଲ୍ ଉତ୍ପାଦନ ବିଶ୍ୱ ସ୍ତରରେ ତୃତୀୟ ସ୍ଥାନରେ ଥିଲା, ଯାହା ୮୭ ନିୟୁତ ଟନ୍ ଅତିକ୍ରମ କରିଥିଲା।6ଆପଲ୍ରେ ଫ୍ଲାଭୋନଏଡ୍ସ ଏବଂ କାଫିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ କ୍ଲୋରୋଜେନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଭଳି ଫେନୋଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ସମେତ ଅନେକ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ଥାଏ।7ଯେହେତୁ ସେଓ ରସ ସାଧାରଣତଃ ଏହାର ସ୍ପଷ୍ଟ ରୂପରେ ପିଇଥାଏ, ପ୍ରାୟ 50% ରୁ 90% ଫେନୋଲିକ୍ ଉପାଦାନ ଫିଲ୍ଟେରେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ।8ଆଜିକାଲି, ଗ୍ରାହକମାନେ କମ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୃତ ଉତ୍ପାଦ ବାଛିବାକୁ ପସନ୍ଦ କରନ୍ତି, ଯେପରିକି ଉଚ୍ଚ ପଲିଫେନୋଲ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ ମେଘୁଆ ଆପଲ୍ ରସ। ତଥାପି, ଏହାର ଉଚ୍ଚ ଫେନୋଲିକ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ଯୋଗୁଁ, ଏହି ପ୍ରକାରର ଆପଲ୍ ରସ ବିଶେଷ ଭାବରେ ରଙ୍ଗ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଏବଂ କଳା ପଡ଼ିବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ।9ସେଓ ରସକୁ କଳା କରିବା କମାଇବା କିମ୍ବା ରୋକିବା ପାଇଁ 60-90°C ତାପମାତ୍ରାରେ ପାଶ୍ଚୁରାଇଜେସନ୍ ଭଳି ତାପ ଚିକିତ୍ସା ପଦ୍ଧତି ସମେତ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।10ତେବେ, ସାଉସେଡା-ଗାଲଭେଜଙ୍କ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଅନୁଯାୟୀ |11, ତାପଜ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ଅସ୍ଥିର ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥକୁ ନଷ୍ଟ କରିପାରେ ଏବଂ ସେଓ ରସର ଅର୍ଗାନୋଲେପ୍ଟିକ୍ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ। ତାପଜ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପଦ୍ଧତିର ବିକଳ୍ପଗୁଡ଼ିକରେ ସୁପରକ୍ରିଟିକାଲ୍ କାର୍ବନ ଡାଇଅକ୍ସାଇଡ୍, ଅଲ୍ଟ୍ରାଭାୟୋଲେଟ୍ ବିକିରଣ, ଅଲ୍ଟ୍ରାସାଉଣ୍ଡ, ଉଚ୍ଚ ଜଳସ୍ନାତକ ଚାପ, କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ-ଚାପ ସମନ୍ୱୟକରଣ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ।12ଏହି ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟାର ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ଉପଯୁକ୍ତ ଫଳ ରସର ଅମଳ ବ୍ୟବହୃତ ପାରାମିଟର ଏବଂ ଉତ୍ପାଦର ଗୁଣବତ୍ତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ। ଉଚ୍ଚ ମୂଲ୍ୟ, କିଛି ଖାଦ୍ୟ ଉତ୍ପାଦର ଗୁଣବତ୍ତା ଉପରେ ପ୍ରତିକୂଳ ପ୍ରଭାବ କିମ୍ବା ଅପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଏନଜାଇମ ନିଷ୍କ୍ରିୟତା ଦ୍ୱାରା ଏଗୁଡ଼ିକର ବ୍ୟାପକ ବ୍ୟବହାର ସୀମିତ।୧୩,୧୪
ଫଳ ରସକୁ ସ୍ଥିର ଏବଂ ସ୍ପଷ୍ଟ କରିବା ପାଇଁ ଲାକେସ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ।15ଗୋକମେନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ।16ଫଳ ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପାଇଁ ଲାକେସ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରନ୍ତୁ କାରଣ ଏହା ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ପଲିମର କିମ୍ବା ଅଲିଗୋମରରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରି ଅପସାରଣ କରେ ଯାହା ଯେକୌଣସି ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲ୍ଟ୍ରେସନ୍ ଝିଲ୍ଲୀ ଦ୍ୱାରା ସହଜରେ ଅପସାରିତ ହୋଇଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଆପଲ୍ ରସ 50°C ତାପମାତ୍ରାରେ ଛଅ ସପ୍ତାହ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସ୍ଥିର ରଙ୍ଗ ଏବଂ ସ୍ପଷ୍ଟତା ବଜାୟ ରଖିଥାଏ। ବିଶୋଧିତ *ଟ୍ରାଇକୋଡର୍ମା* ଲାକେସ୍ ଆଲୁମିନା ମଣି ଉପରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଆପଲ୍ ରସର ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଯୋଗୁଁ ହେଉଥିବା ସ୍ୱାଦହୀନ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ବାଛିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା।17
ସେଓ ରସର ପ୍ରାୟ 80-90% ଅସ୍ଥିର ଉପାଦାନ ହେଉଛି ଏଷ୍ଟର ଏବଂ ଆଲଡିହାଇଡ୍, ଯାହା ରସକୁ ଏକ ଅନନ୍ୟ ସୁଗନ୍ଧ ପ୍ରଦାନ କରେ।18ସେଓ ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପାଇଁ ନଡ଼ିଆ କୋଷରୁ ପ୍ରାକୃତିକ ତନ୍ତୁରୁ ତିଆରି ଏକ ଶସ୍ତା ସପୋର୍ଟରେ *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ଭର୍ସିକଲର* ରୁ ଲାକେସ୍ ଅଚଳ କରାଯାଇଥିଲା।19ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଏନଜାଇମ-ମୁକ୍ତ କିମ୍ବା ସ୍ଥିରୀକରଣ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି କିମ୍ବା ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲ୍ଟ୍ରେସନ ସହିତ ମିଶ୍ରଣରେ ସେଓ ରସ ସ୍ଥିରୀକରଣ (ରଙ୍ଗ ଏବଂ କଳାତା) ବିଷୟରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଛି।୫,୧୯ତଥାପି, ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ କବକ ଲାକେସେସ୍ର ସେପ୍ ରସର ଭୌତିକ ରାସାୟନିକ ଗୁଣ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ଅସ୍ପଷ୍ଟ ରହିଛି। ତେଣୁ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଥିଲା କବକ ଲାକେସେସ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ ଦୁଇ ସପ୍ତାହର ରେଫ୍ରିଜେରେଟେଡ୍ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପରେ ସେପ୍ ରସର ଭୌତିକ ରାସାୟନିକ ଗୁଣ, ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଦନ୍ତ କରିବା। ଲାକେସେସ୍ରେ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ଅକ୍ସିଡାଇଜ୍ କରିବାର କ୍ଷମତା ଥାଏ, ଯାହା ସେମାନଙ୍କୁ ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ସମେତ ବିଭିନ୍ନ ଶିଳ୍ପ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିବଦ୍ଧ କରିଥାଏ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରୁ ଲାକେସେସ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣରେ ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ପ୍ରଭାବ ପାଇଁ ଆଦର୍ଶ ଅବସ୍ଥା ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥିଲା। ଯଦିଓ ଓଏଷ୍ଟର୍ ମଶରୁମ୍ (P. ostreatus NRC 620) ଉପରେ ଗବେଷଣା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସୀମିତ, ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ବିଭିନ୍ନ କବକ ଉତ୍ସ, ଯେପରିକି ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ଭର୍ସିକଲର ଏବଂ ଗାନୋଡର୍ମା ଲୁସିଡମ୍ରୁ ଏଞ୍ଜାଇମ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିଛି। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଥିଲା ଖାଦ୍ୟ ଶିଳ୍ପରେ ଏହି ଏଞ୍ଜାଇମର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ଏବଂ ଏହାର ଅନନ୍ୟ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକୁ, ବିଶେଷକରି ଏହାର ଆଦର୍ଶ pH ଏବଂ ତାପମାତ୍ରାକୁ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ କରିବା।
2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍ (କାନାଡା) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା। ଅନ୍ୟ ସମସ୍ତ ରିଏଜେଣ୍ଟ ବିଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ଗ୍ରେଡର ଥିଲା।
ଜାତୀୟ ଗବେଷଣା କେନ୍ଦ୍ରର ମାଇକ୍ରୋବାଏଲ୍ କଲଚର ସଂଗ୍ରହ କେନ୍ଦ୍ର ଜଣାଶୁଣା ଓଏଷ୍ଟର ମସରୁମ୍ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ NRC620 ପାଇଲା। ଉପକଲ୍ଚର ପରେ, ଏହି ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ଆଗାର ସ୍ଲାଣ୍ଟରେ 4°C ତାପମାତ୍ରାରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନୋକୁଲମ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପଦ୍ଧତି ନିମ୍ନଲିଖିତ ଥିଲା: 10 ଦିନ ପୁରୁଣା, ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିକଶିତ ମାଇସେଲିୟମ୍ ଆଳୁ ଡେକ୍ସଟ୍ରୋଜ୍ ଆଗାର ପ୍ଲେଟ୍ରେ ଟୀକାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 28°C ତାପମାତ୍ରାରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 10 ଦିନ ପରେ, ଏକ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ଧାତୁ ପଞ୍ଚ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ତିନୋଟି 12-ମିମି-ବ୍ୟାସ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବ୍ଲକକୁ ଆଗର ମିଡିଆରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 50 mL ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ କଲଚର ମାଧ୍ୟମ (pH 5.0, ଯେପରି ପୂର୍ବରୁ ଓଥ୍ମାନ ଏଟ୍ ଅଲ୍ ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଛି) ଧାରଣ କରିଥିବା କପା ପ୍ଲଗ୍ ସହିତ 250-ମିଲି ଏର୍ଲେନମେୟର ଫ୍ଲାସ୍କରେ ରଖାଯାଇଥିଲା।20)। କଲଚରଗୁଡ଼ିକୁ 28°C ତାପମାତ୍ରାରେ 18 ଦିନ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ କଲଚରଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ୱାଟମ୍ୟାନ୍ ନମ୍ବର 1 ଫିଲ୍ଟର ପେପର ମାଧ୍ୟମରେ ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଫଳସ୍ୱରୂପ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟ ଏନଜାଇମ ଉତ୍ସ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥିଲା।
ABTS କୁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣ (2 mL) ରେ 500 μL 0.3 mM ABTS (0.1 M ସୋଡିୟମ୍ ସାଇଟ୍ରେଟ୍ ବଫର, pH 4.5 ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ) ଏବଂ ଆବଶ୍ୟକ ପରିମାଣର ଏନଜାଇମ୍ ନମୁନା ଡିଷ୍ଟିଲେଡ୍ ପାଣିରେ ମିଳାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା।୨୧,୨୨ଲାକେସ୍ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ (28 °C ± 2) ABTSକୁ ଅକ୍ସିଡାଇଜ୍ କରିପାରିବ ବୋଲି ବିଚାର କରି, 420 nm (ε) ରେ ଶୋଷଣ ବୃଦ୍ଧି ମାପ କରି ABTS ଅକ୍ସିଡାଇଜ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।୪୨୦= 36,000 ସେମି-1 M -1) ଏକ Agilent Carry-100 UV ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି। ପ୍ରତି ମିନିଟ୍ ରେ 1 μmol ABTS ଅକ୍ସିଡାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଗୋଟିଏ ୟୁନିଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ ଥିଲା। ପ୍ରୋଟିନ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍ ଆଲବୁମିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ରାଡଫୋର୍ଡ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।୨୩,୨୪
ଓଏଷ୍ଟର ମଶରୁ ଷ୍ଟ୍ରେନ NRC 620 ରୁ ଏନଜାଇମ ପାଇବା ପରେ, 28 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ ତାପମାତ୍ରାରେ ସ୍ଥିର ଅବସ୍ଥାରେ 25 ଦିନ ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ଚାଷ ବ୍ୟବଧାନରେ ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ତାପମାତ୍ରାର ପ୍ରଭାବ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପାଇଁ, 20 ରୁ 90 °C ତାପମାତ୍ରା ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଏନଜାଇମ୍ ଯୋଡିବା ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭ କରିବା ପୂର୍ବରୁ, ବଫର (0.1 M ସୋଡିୟମ୍ ସାଇଟ୍ରେଟ୍, pH 4.5) ଏବଂ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ (ABTS) କୁ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 0.05 M ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ବଫର (pH 7.0) ରେ ଯଥାକ୍ରମେ 40, 50, 60, ଏବଂ 70 °C ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଏନଜାଇମ୍ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ABTS ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଅବଶିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
0.1 M ସାଇଟ୍ରେଟ୍-ଫସଫେଟ୍ ବଫରରେ 2.5 ରୁ 7.0 pH ପରିସର ସହିତ ABTS କୁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ pH ର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। pH ସ୍ଥିରତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ 0.1 M ସାଇଟ୍ରେଟ୍ ଏବଂ Tris ବଫର (pH 3, 4, 6, ଏବଂ 7) ରେ ଦୁଇ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 40°C ରେ ଏନଜାଇମ୍ ଦ୍ରବଣକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ABTS ସହିତ ଅବଶିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଲାକେସ୍କୁ ଯଥାକ୍ରମେ 2.5 mM ଏବଂ 10 mM ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ବିଭିନ୍ନ ଧାତୁ ଆୟନ (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, ଏବଂ Mn2+) ଧାରଣ କରିଥିବା ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ବଫର (0.05 M, pH 7.0) ରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭ କରିବା ପାଇଁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ (ABTS) ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଆପେକ୍ଷିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
ଗତିଜ ପାରାମିଟର (Vmax ଏବଂ Km) ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା (0.025–3 mM) ରେ ଲାକେସ୍ ଦ୍ୱାରା ABTS ଅକ୍ସିଡେସନକୁ pH 4.5 ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଗତିଜସ୍ଥିରାଙ୍କମାଇକେଲିସ୍-ମେଣ୍ଟେନ୍ ସମୀକରଣର ଗଣନା ଏକ ଲାଇନୱିଭର-ବର୍କ ପ୍ଲଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଏକ କାର୍ଯ୍ୟ ଭାବରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ହାରର ପାରସ୍ପରିକ ପ୍ଲଟ୍ କରିଥାଏ। ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ୍ ପ୍ରିଜମ୍ ସଂସ୍କରଣ 6.01 ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଲାଇନୱିଭର-ବର୍କ ପ୍ଲଟ୍ ରୁ ଗତିଜ ସ୍ଥିରାଙ୍କ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ନଳକୂପ ପାଣିରେ ଭଲ ଭାବରେ ଧୋଇବା ପରେ, ସେଗୁଡ଼ିକୁ ଅଧା କାଟି ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ବ୍ରାଉନ୍ MP80 ଆପଲ୍ ଜୁସର୍ (ଜର୍ମାନୀରେ ତିଆରି) ବ୍ୟବହାର କରି ରସ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। ରସକୁ ଚାରୋଟି ସ୍ତରର ଚିଜ୍କ୍ଲଥ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିଲା। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀରେ କୌଣସି ଏନଜାଇମ୍ ଯୋଡାଯାଇ ନଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ସଦ୍ୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଆପଲ୍ ଜୁସରେ 2.0% ଲାକେସ୍ (ସର୍ବାଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ସାନ୍ଦ୍ରତା ପରୀକ୍ଷିତ) ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା, ଯାହାକୁ ତାପରେ 4°C ରେ ଦୁଇ ସପ୍ତାହ ପାଇଁ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ବୋଲଟନ୍ ଏଟ୍ ପଦ୍ଧତି ଅନୁସାରେ ଟାଇଟ୍ରେଟେବଲ୍ ଏସିଡିଟି (TA) ଏବଂ pH ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲାଅନ୍ୟାନ୍ୟ ୨୭। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାର pH ଏକ ଡିଜିଟାଲ pH ମିଟର (JENWAY 3510 pH ମିଟର) ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ନିମ୍ନଲିଖିତ ସୂତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରି ମାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉପରେ ଆଧାର କରି ଟାଇଟ୍ରାଟେବଲ୍ ଏସିଡିଟି (TA) ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଯେଉଁଠାରେ V ଏବଂ C ହେଉଛି ଟାଇଟ୍ରେସନରେ ବ୍ୟବହୃତ ସୋଡିୟମ୍ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସାଇଡ୍ ଦ୍ରବଣର ଆୟତନ (mL) ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ରତା (0.1 mol/L)। K ହେଉଛି ମାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ରୂପାନ୍ତର ଗୁଣାଙ୍କ, 0.067 ସହିତ ସମାନ, ଏବଂ W ହେଉଛି ଆପଲ୍ ରସ ର ବସ୍ତୁତ୍ୱ (g)।
ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ କଠିନ ପଦାର୍ଥ (ଟିଡିଏସ୍) ସମସ୍ତ ରସ ନମୁନାର ପରିମାଣ PAL-1 ପକେଟ ରିଫ୍ରାକ୍ଟୋମିଟର (ATAGO, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାପ ପରେ, ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ଲେନ୍ସକୁ ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ସେଓ ରସ ନମୁନାକୁ ତିନିଥର ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାର ମୂଲ୍ୟ ତିନୋଟି ମାପର ହାରାହାରି କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ସେଓ ରସ ନମୁନା ପାଇଁ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତି ମଧ୍ୟ ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକର ହାରାହାରି କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଆପଲ୍ ରସ ନମୁନାର ଭିସ୍କୋଇଲାଷ୍ଟିସିଟି ଏକ ଘୂର୍ଣ୍ଣନାତ୍ମକ ଭିସ୍କୋମିଟର (RV, Rheotest 2, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ନମୁନାଟି ଭିସ୍କୋମିଟରର "S2" ସିଲିଣ୍ଡର ଭିତରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। ସିଅର୍ ଚାପ ବନାମ ସିଅର୍ ହାର ବକ୍ରର ଢାଲ ଦ୍ୱାରା ସ୍ପଷ୍ଟ ସାନ୍ତ୍ୱନାକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ସିଅର୍ ଚାପ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ସିଅର୍ ହାରରେ ସମ୍ପୃକ୍ତ ବକ୍ରରୁ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା (1.00 ରୁ 437.4 s⁻¹)। ସ୍ପଷ୍ଟ ସାନ୍ତ୍ୱନା ଗଣନା ପାଇଁ ସୂତ୍ର ନିମ୍ନଲିଖିତ:
ଯେଉଁଠାରେ η ହେଉଛି ସ୍ପଷ୍ଟ ସାନ୍ଦ୍ରତା (cP), τ ହେଉଛି ସିଅର୍ ଚାପ (dyn/cm²), γ ହେଉଛି ସିଅର୍ ହାର (sec⁻¹), ଏବଂ (τ) କୁ ନିମ୍ନଲିଖିତ ସୂତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରି ଟର୍କ (α) ଏବଂ ସିଲିଣ୍ଡର (Z) ମୂଲ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଏ: τ = Z . α।
ମେଇଡାଭ୍ ଏଟ୍ ପଦ୍ଧତି ଅନୁସାରେ ବ୍ରାଉନିଂ ଇଣ୍ଡେକ୍ସ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲାଅନ୍ୟାନ୍ୟ ୨୯। ଏକ 10-ମିଲି ରସ ନମୁନାକୁ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 2750 xg ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା। 5 ମିଲି ରସ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟକୁ 5 ମିଲି 95% ଇଥାନଲ୍ ସହିତ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ ଶିମାଡଜୁ UV ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (UV-1601 PC) ବ୍ୟବହାର କରି ମିଶ୍ରଣର ଅବଶୋଷଣ 420 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
ବୋଲଟନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ ଫଲିନ୍-ସିଓକାଲ୍ଟେଉ ରିଏଜେଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ମୋଟ ଫେନୋଲିକ୍ କଣ୍ଟେଣ୍ଟ (TPC) ରଙ୍ଗମିତ୍ରିକ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।[27]]। 0 ରୁ 500 mg/L ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସାନ୍ଦ୍ରତା ପାଇଁ ଗାଲିକ୍ ଏସିଡର ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା (ର²= ୦.୯୯୭)। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକୁ ଗାଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ସମକକ୍ଷ (mg GAE/mL) ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଏ।
୨୫ μL ଆପଲ୍ ରସରେ ୧୨୫ μL ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣି ଏବଂ ୨୮୫୦ μL FRAP ଦ୍ରବଣ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ମିଶ୍ରଣକୁ ଅନ୍ଧାରରେ ଛାଡି ଦିଅନ୍ତୁ।30ସର୍ବନିମ୍ନ। ତା'ପରେ ଏକ ଶିମାଡଜୁ UV ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (UV-1601 PC) ବ୍ୟବହାର କରି 593 nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ମାପ କରନ୍ତୁ। FRAP reagent 300 mM ଆସେଟେଟ୍ ବଫର (pH 3.6), 20 mM ଲୁହା (III) କ୍ଲୋରାଇଡ୍, ଏବଂ 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (40 mM HCl ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ) 10:1:1 ଅନୁପାତରେ ମିଶ୍ରଣ କରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ଟ୍ରୋଲକ୍ସକୁ ମାନକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା (R²= 0.999), ଏବଂ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକୁ μM ଟ୍ରୋଲକ୍ସ/ମିଲି ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଛି।
DPPH ମୁକ୍ତ ରାଡିକାଲ୍ସକୁ ଦୂର କରିବାର କ୍ଷମତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ DPPH ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇନଥିବା ରସର ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା।31ଦଶ ମାଇକ୍ରୋଲିଟର ରସକୁ 1 ମିଲି DPPH ଦ୍ରବଣ (100 μM) ମିଥାନଲରେ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଅନ୍ଧାରରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରେ, ଏକ ଶିମାଡଜୁ UV ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର (UV-1601 PC) ବ୍ୟବହାର କରି ମିଶ୍ରଣର ଅବଶୋଷଣ 517 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ କାଲିବ୍ରେସନ୍ କର୍ଭ ଉପରେ ଆଧାରିତ ଟ୍ରୋଲକ୍ସ ସମକକ୍ଷ (μM ଟ୍ରୋଲକ୍ସ/ml) ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥିଲା (R2= ୦.୯୯୦)।
ପ୍ରାପ୍ତ ତଥ୍ୟରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ କିଣ୍ବନର 18ତମ ଦିନ ଶେଷ ସୁଦ୍ଧା NRC 620 ଓଏଷ୍ଟର ଛତୁରେ ସର୍ବାଧିକ ଲାକେସ୍ ଉତ୍ପାଦନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା 1302 U/L କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା। ଏହା ଲାକେସ୍ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଚାଷ ସମୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଆଧାର ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥିଲା (ଚିତ୍ର 1)। ଯଦିଓ ଚାଷ ସମୟ ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ଏନଜାଇମ ଉତ୍ପାଦନ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା, ବୃଦ୍ଧି ହାର ଚାଷ ସମୟ ସହିତ ସିଧାସଳଖ ସମାନୁପାତିକ ନଥିଲା; 21 ଦିନ ପରେ, ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କେବଳ 90 U/L (1390 U/L) ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ତେଣୁ, ବର୍ଦ୍ଧିତ ଚାଷ ସମୟର ଆର୍ଥିକ ଲାଭ ସହିତ ଉତ୍ପାଦ ଉତ୍ପାଦନକୁ ସନ୍ତୁଳିତ କରିବା ପାଇଁ ଶେଷରେ 18 ଦିନକୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଚାଷ ସମୟ ଭାବରେ ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା।
ପ୍ଲୁରୋଟସ୍ ଅଷ୍ଟ୍ରିଟସ୍ NRC 620 ରେ ଲାକେସ୍ ଅମଳ ଉପରେ ଚାଷ ସମୟର ପ୍ରଭାବ। ତିନୋଟି (12 ମିମି) କବକ ମାଇସେଲିଆଲ୍ ବ୍ଲକକୁ 50 ମିଲି ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମରେ ଟୀକା ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା'ପରେ ବିଭିନ୍ନ ସମୟ ପାଇଁ 28 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା।
ଅନ୍ୟ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ସମନ୍ୱୟ ରଖି, ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ କବକ ଦ୍ୱାରା ସର୍ବାଧିକ ଲାକେସ୍ କ୍ଷରଣ ହାସଲ କରିବା ପାଇଁ ଆଦର୍ଶ ସଂସ୍କୃତି ସମୟ 7 ରୁ 36 ଦିନ ମଧ୍ୟରେ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଛି।32ଏଜିକ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟଙ୍କ ଅନୁସାରେ।33, *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* WRF03 କିଣ୍ବନ ପ୍ରକ୍ରିୟାର ନବମ ଦିନର ଶେଷ ସୁଦ୍ଧା ସର୍ବାଧିକ ପରିମାଣର ଲାକେସ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିଥିଲା, ଯାହାର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ 1637 U/mg ପ୍ରୋଟିନ୍ ଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଓଥମାନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ।34ଦେଖିଲା ଯେ *ଟ୍ରାଇକୋଡର୍ମା ହାର୍ଜିଆନମ୍* S7113 କଲ୍ଚରର ପଞ୍ଚମ ଦିନରେ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣରେ ଲାକେସ୍ କ୍ଷରଣ କରିଥିଲା। ଲାକେସ୍ ଉତ୍ପାଦନ ହାର ଚତୁର୍ଦ୍ଦଶ ଦିନରେ ଏକ ଶୀର୍ଷ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଧୀରେ ଧୀରେ ହ୍ରାସ ପାଇଲା।34ଯଦିଓ ମୁଖ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ମଧ୍ୟ ଏନଜାଇମ କ୍ଷରଣ ହୋଇପାରେ, ଏହା ସାଧାରଣତଃ ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ସର୍ବାଧିକ ହୋଇଥାଏ ଏବଂ କାର୍ବନ କିମ୍ବା ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ଉତ୍ସର ବ୍ୟବହାର ଦ୍ୱାରା ଏହା ଆରମ୍ଭ ହୁଏ।୩୪,୩୫
ଯଦିଓ Pleurotus ostreatus NRC 620 ରୁ ଲାକେସ୍ 50°C ରୁ 80°C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବିସ୍ତୃତ ତାପମାତ୍ରା ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା, ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ (69-98%) ନିକଟରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା, ଏହାର ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ 70°C ରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 2a)। ଏହି ତାପମାତ୍ରା ପରିସର ବାହାରେ, ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରାୟ 70°C ରେ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଏନଜାଇମ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ସକ୍ରିୟ ଥାଏ, କାରଣ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଗତିଜ ଶକ୍ତିକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ।
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରେ ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା (a) ଏବଂ pH (b) ର ପ୍ରଭାବ। ଏନଜାଇମ୍ ଯୋଡିବା ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭ କରିବା ପୂର୍ବରୁ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ମିଶ୍ରଣକୁ ବିଭିନ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ପୂର୍ବରୁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରି 20 ରୁ 90 °C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ତାପମାତ୍ରା ହାସଲ କରାଯାଇଥିଲା। 2.5 ରୁ 7.0 pH ପରିସର ମଧ୍ୟରେ 0.1 M ସାଇଟ୍ରେଟ୍-ଫସଫେଟ୍ ବଫର ଥିବା ଦ୍ରବଣରେ ABTS କୁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ pH ର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା।
ଏଜିକ୍ ଏବଂଙ୍କ ଅନୁସାରେଅନ୍ୟାନ୍ୟ ୩୩, *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* WRF03 ଲାକେସ୍ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ତାପମାତ୍ରା 55 °C, ଯାହା *ଗାନୋଡର୍ମା ଲୁସିଡମ୍* ପାଇଁ ସମାନ।ଲାକେସ୩୬ଏବଂ *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* KU-RNW02737 ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ତାପମାତ୍ରା (50 °C) ସହିତ ସମାନଲାକେସ୍ . ବାଲଡ୍ରିଆନ୍38ଉଲ୍ଲେଖ କରିଛନ୍ତି ଯେ, ଅନ୍ୟ ଲିଗ୍ନିନ୍-ଅପମାନକାରୀ ଏନଜାଇମ୍ ସିଷ୍ଟମ ପରି, ଲାକେସ୍ ପାଇଁ ଆଦର୍ଶ ତାପମାତ୍ରା ପରିସର 50 ରୁ 70 °C ମଧ୍ୟରେ।
ଫଳାଫଳରୁ ଜଣାପଡ଼ିଛି ଯେ ଏନଜାଇମଟି pH 3.0 ରେ ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା, pH 3.5 ରେ 94% କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା। ତଥାପି, ଏହା 2.5 ରୁ 7.0 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏକ ବିସ୍ତୃତ pH ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ସକ୍ରିୟ ରହିଥିଲା (ଚିତ୍ର 2b)। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଏହା ନିରପେକ୍ଷ କିମ୍ବା କ୍ଷାରୀୟ ଅବସ୍ଥା ତୁଳନାରେ ଏସିଡିକ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଅଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା। ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ 2.5 ରୁ 4.5 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ pH ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅତି କମରେ 77% ରହିଥିଲା, କିନ୍ତୁ pH 7.0 ରେ କେବଳ ପ୍ରାୟ 38% ପହଞ୍ଚିଥିଲା। *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* WRF03 ରୁ ଲାକେସ୍ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ pH 4.533 ଥିଲା, ଯାହା *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* KU-RNW02737, *ଟ୍ରାଏକୋଡର୍ମା ହାର୍ଜାନିୟମ୍* 39, *ପ୍ଲେୟୁରୋଟସ୍* sp. 40, ଏବଂ *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ହିରସୁଟା* 41 ରୁ ଲାକେସ୍ ପାଇଁ pH ସହିତ ସମାନ। ତଥାପି, ଚେରିନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ ଦ୍ୱାରା କରାଯାଇଥିବା ଅଧ୍ୟୟନ ଅନୁସାରେ।42, *ପଲିମୋର୍ଫା f. sp.* WR710-1 ରୁ ଲାକେସ୍ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ pH ହେଉଛି 2.2, ଯେତେବେଳେ *ପଲିମୋର୍ଫା f. sp.* IBL-04 ରୁ ଲାକେସ୍ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ pH ହେଉଛି 5.043। T2/T3 ଲାକେସ୍ ର ତମ୍ବା ପରମାଣୁ ସହିତ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସାଇଡ୍ ଆନାୟନ୍ସ (ଲାକେସ୍ ଇନହିବିଟର) ର ବନ୍ଧନ ନିରପେକ୍ଷ କିମ୍ବା କ୍ଷାରୀୟ pH ପରିସ୍ଥିତିରେ ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହ୍ରାସର କାରଣ ହୋଇପାରେ। ଏହା T1 କେନ୍ଦ୍ରରୁ T2/T3 କେନ୍ଦ୍ରକୁ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତରକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରାସୀମିତ କରିବାଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ୨୩,୪୪
ବିଭିନ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ଏନଜାଇମକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ କରି, ଏହା ଜଣାପଡିଲା ଯେ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟ ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ଉଭୟ ଏନଜାଇମ ସ୍ଥିରତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥିଲା। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ, *ଟ୍ରାମେଟେସ ପଲିଜୋନା* NRC 620 ରୁ ଲାକେସ 40℃ ଏବଂ 50℃ ରେ ଉଚ୍ଚ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା, 120 ମିନିଟ୍ ପରେ ଯଥାକ୍ରମେ 68.33% ଏବଂ 59.61% ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରଖିଥିଲା (ଚିତ୍ର 3a)। ବିପରୀତରେ, ସମାନ ପରିସ୍ଥିତିରେ (40℃ ଏବଂ 50℃, 120 ମିନିଟ୍), *ଟ୍ରାମେଟେସ ପଲିଜୋନା* WRF03 ରୁ ଲାକେସ 64.38% ଏବଂ 42.92% ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରଖିଥିଲା।33ବିପରୀତରେ, ବୃଦ୍ଧି ପାଉଥିବା ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟ ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* NRC 620 ଲାକେସ୍ ର ସ୍ଥିରତା ହ୍ରାସ କରିଥିଲା; 60 ℃ ଏବଂ 70 ℃ ରେ 60 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ପରେ, ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯଥାକ୍ରମେ 39.24% ଏବଂ 1.72% କୁ ହ୍ରାସ ପାଇଲା (ଚିତ୍ର 3a)। ପରୀକ୍ଷଣ ଫଳାଫଳ ସହିତ ସମନ୍ୱୟ ରଖି, *ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା* WRF03 ରୁ ଲାକେସ୍ ତାପଜ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ 40 ଏବଂ 50 ℃ ରେ ଅଧିକ ସ୍ଥିରତା ଦେଖାଇଲା।33ସେହିପରି, ଲୁଏଙ୍ଗଜାରୋଏନକିଟ୍ ଏବଂଅନ୍ୟାନ୍ୟ ୩୭ଏବଂ ଚେରିନ୍ ଏଟ୍ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ୪୨ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା KURNW027 ଏବଂ ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା WR710-1 ରୁ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଯଥାକ୍ରମେ 50 °C ତାପମାତ୍ରାରେ ଲାକେସେସର ସ୍ଥିରତା ରିପୋର୍ଟ କରିଥିଲେ। ବିଭିନ୍ନ ଜୈବପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା କ୍ଷେତ୍ରରେ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ଏକ ଉପଯୋଗୀ ଜୈବଉତ୍ପାଟକ ଭାବରେ, ଲାକେସର ଏକ ବିସ୍ତୃତ ତାପମାତ୍ରା ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଭଲ ସ୍ଥିରତା ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ରହିବା ଉଚିତ।
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରୁ ଲାକେସର ଥର୍ମୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ସ୍ଥିରତା (a) ଏବଂ pH ସ୍ଥିରତା (b)। 0.05 M ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ବଫର (pH 7.0) ରେ ଯଥାକ୍ରମେ 40, 50, 60, ଏବଂ 70 °C ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଏନଜାଇମ୍ ଦ୍ରବଣକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରି ଥର୍ମୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ସ୍ଥିରତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। 0.1 M ସାଇଟ୍ରେଟ୍ ବଫର ଏବଂ Tris ବଫର (pH 3, 4, 6, ଏବଂ 7) ରେ 40 °C ରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଏନଜାଇମ୍ ଦ୍ରବଣକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରି pH ସ୍ଥିରତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ ଏକ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ABTS ବ୍ୟବହାର କରି ଅବଶିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ଏନଜାଇମ ବ୍ୟବହାର ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ପରିସ୍ଥିତି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଲାକେସ୍ ସ୍ଥିରତା ଉପରେ pH ର ପ୍ରଭାବ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ। ବିଭିନ୍ନ pH ମୂଲ୍ୟର ସଂସ୍ପର୍ଶ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଗଠନର ସ୍ଥିରତାକୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥିଲା, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଏନଜାଇମ ଅଣୁର ସ୍ଥିରତା ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥିଲା। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଥିଲା ଯେ ଏସିଡିକ୍ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଏସିଡିକ୍ କମ୍ ସ୍ଥିର ଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଏହା ଉଚ୍ଚ pH ମୂଲ୍ୟ (ନିରପେକ୍ଷ ଏବଂ କ୍ଷାରୀୟ କ୍ଷେତ୍ର) ରେ ଉତ୍ତମ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା। 7.0, 6.0, 4.0, ଏବଂ 3.0 ର pH ମୂଲ୍ୟରେ, 120 ମିନିଟ୍ ପରେ ଏଞ୍ଜିମ ପ୍ରତିଧାରଣ ହାର ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାୟ 100%, 62.54%, 52.39% ଏବଂ 11.14% ଥିଲା (ଚିତ୍ର 3b)। *ଷ୍ଟ୍ରୋମ୍ବସ୍ ମଲ୍ଟିସସ୍* WRF03 ଲାକେସ୍ ନିରପେକ୍ଷ pH ମୂଲ୍ୟ (5.5–6.5) ରେ ଅଧିକ ସ୍ଥିରତା ଏବଂ ଏସିଡିକ୍ pH ମୂଲ୍ୟ (4.0 ତଳେ) ରେ କମ୍ ସ୍ଥିରତା ଦେଖାଇଥିଲା। ୫.୫, ୬.୦ ଏବଂ ୬.୫ ପିଏଚ୍ ମୂଲ୍ୟରେ ୧୨୦ ମିନିଟ୍ ପରେ, ଏନଜାଇମ ପ୍ରତିଧାରଣ ହାର ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାୟ ୮୨%, ୧୦୦% ଏବଂ ୯୩% ଥିଲା।33ଖୈରିନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ।42ଉଲ୍ଲେଖ କରିଛନ୍ତି ଯେ ଟ୍ରାମେଟେସ୍ ପଲିଜୋନା WR710-1 ରୁ ଲାକେସ୍ 6.0 ରୁ 7.0 pH ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ସ୍ଥିର ଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ସୟେଦ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ।45ନିରପେକ୍ଷ pH ପରିସ୍ଥିତିରେ ଲାକେସ୍ ଅଧିକ ସ୍ଥିର ଥିଲା ବୋଲି ଦର୍ଶାଇଥିଲେ। ତଥାପି, ସେରେନା ୟୁନିକଲରରୁ ଲାକେସ୍ କ୍ଷାରୀୟ ପରିସ୍ଥିତିରେ ମଧ୍ୟ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲେ (pH 9.0)46। ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ଲାକେସେସ୍ ଏକ ବିସ୍ତୃତ pH ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଉଚ୍ଚ ସ୍ଥିରତା ଦେଖାଇଥିଲା। ଏହା ଶିଳ୍ପ ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ହୋଇପାରେ।
ଯେହେତୁ କିଛି ଧାତୁ ଆୟନଗୁଡ଼ିକର ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ଉଭୟ ଉତ୍ତେଜକ ଏବଂ ନିରୋଧକ ପ୍ରଭାବ ଥାଏ, ଶିଳ୍ପ ପ୍ରୟୋଗରେ ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ସେମାନଙ୍କର ପ୍ରଭାବ ବିଚାର କରାଯିବା ଉଚିତ। ଏହା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରଣ ଧାତୁ ଆୟନଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣ ପରିବେଶଗତ ପ୍ରଦୂଷକ ଯାହା ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ଏନଜାଇମର ସ୍ଥିରତା ଏବଂ ସଂଶ୍ଳେଷଣକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ।47*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରୁ ଲାକେସ୍ ଉପରେ ଏକାଧିକ ଧାତୁ ଆୟନର ପ୍ରଭାବ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଅନୁରୂପ ପରୀକ୍ଷଣ କରିଥିଲୁ। ଚିତ୍ର 4 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, ବ୍ୟବହୃତ ଧାତୁର ପ୍ରକାର ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି, ଧାତୁ ଆୟନ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ 2.5 mM ରୁ 10 mM ବୃଦ୍ଧି କରିବା ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥିଲା। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ,ମାଇଗ୍ରେସନ୍²⁺ , କୋ²⁺ , ଜ୍ନ²⁺, ଏବଂକୁ²⁺ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଉତ୍ତେଜିତ ଏବଂ ସକ୍ରିୟ କରିପାରେ, ଯେତେବେଳେନା⁺ , ମନ୍²⁺ , କା²⁺, ଏବଂକେ⁺ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ। 10 mM ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରୁ Cu²⁺ ଏବଂ Mg²⁺ ଆୟନଗୁଡ଼ିକ ଲାକେସର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ସବୁଠାରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ସକ୍ରିୟକାରୀ ଥିଲେ, ଯାହା ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାୟ 34% ଏବଂ 20% ସକ୍ରିୟକରଣ ଡିଗ୍ରୀ ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା। ତଥାପି, 10 mM ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ, Ca²⁺ ଆୟନଗୁଡ଼ିକ ଲାକେସର ସବୁଠାରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ନିରୋଧକ ଥିଲେ, ଯାହା ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରାୟ 60% ହ୍ରାସ କରିଥିଲା।
ପ୍ଲୁରୋଟସ୍ ଅଷ୍ଟ୍ରିଟସ୍ NRC 620 ଲାକେସ୍ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ଧାତୁ ଆୟନ୍ର ପ୍ରଭାବ। ଲାକେସ୍କୁ 2.5 mM ଏବଂ 10 mM ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ବିଭିନ୍ନ ଧାତୁ ଆୟନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ସୋଡିୟମ୍ ଫସଫେଟ୍ ବଫର (0.05 M, pH 7.0) ରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ (ABTS) ଯୋଡିବା ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ପରେ ଆପେକ୍ଷିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
ଆମର ଫଳାଫଳ ଅନ୍ୟ ଲେଖକମାନଙ୍କ ପରି ସମାନ ଯେଉଁମାନେ ଜାଣିପାରିଲେ ଯେ Mg²⁺ ଏବଂ Cu²⁺ *Trametes polyzona* WRF03³ ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତି। Castaño et al.⁴⁸ ଜାଣିଲେ ଯେ *Xylaria* sp. ରୁ ଲାକେସ୍ କିଛି ପରିମାଣରେ ତମ୍ବା ଆୟନ (Cu²⁺) ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ତେଜିତ ହୁଏ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, Foroutanfar et al.⁴⁹ ଏବଂ Si et al.⁵⁰ ଯଥାକ୍ରମେ *Paraconiothyrium variabile* ଏବଂ *Trametes pubescens* ରୁ ଲାକେସ୍ ଉପରେ ସମାନ ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିଲେ। ଏହି ଏନଜାଇମର ପ୍ରକାର II ତମ୍ବା-ବନ୍ଧନ ସ୍ଥାନ (T2) ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ Cu²⁺ ସହିତ ସଂତୃପ୍ତ ହୋଇପାରିବ, ଯାହା ଉଚ୍ଚ Cu²⁺³⁹ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଉତ୍ତେଜନାକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିପାରେ। ଯେହେତୁ ଧଳା ପଚା କବକ ଲାକେସେସ୍ ହେଉଛି ଏକାଧିକ ତମ୍ବା ପରମାଣୁ ଧାରଣ କରୁଥିବା ଅକ୍ସିଡେସ୍, ଲାକେସେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ତମ୍ବା ଆୟନର ପ୍ରଭାବ ବିବିଧ ଏବଂ ଉତ୍ତେଜକ ଏବଂ ନିରୋଧକରୁ ନିରପେକ୍ଷ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପରିସରିତ।⁵¹ ବିପରୀତରେ, ଝୋଉ ଏଟ୍ ଅନ୍ୟ[52]ରିପୋର୍ଟ କରିଛି ଯେକୁ²⁺ତାଇୱାନ ଭୂତଳ ଉଇ (Odontotermes formosanus) ର ଲାକେସ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା। ତଥାପି, ସେରେନା sp. HYB07 ର ଲାକେସ୍[53]ଏବଂ କ୍ଲିଟୋସାଇବ ମ୍ୟାକ୍ସିମା[54]ତମ୍ବା ଆୟନ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇନଥିଲେ।
ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏହାର ଗତିଜ ପାରାମିଟର (Km ଏବଂ Vmax) ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଇଥିଲା; ଏନଜାଇମ ସହିତ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ର ବାନ୍ଧନ ସମ୍ପର୍କ ଯେତେ ଦୃଢ଼ ହେବ, Km ମୂଲ୍ୟ ସେତେ କମ୍ ହେବ ଏବଂ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସେତେ ଅଧିକ ହେବ।୩,୨୧,୫୫*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରୁ ଲାକେସର ଗତିଜ ପାରାମିଟର (Km ଏବଂ Vmax) ଲାଇନ୍ୱେଭର-ବର୍କ ପ୍ଲଟ୍ ପ୍ଲଟ୍ କରି ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ୍ ପ୍ରିଜମ୍ 6.0 ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 5)। ABTS କୁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ, ଫଳାଫଳ 1.99 mM ଏବଂ 16217 μmol ଥିଲା।ସର୍ବନିମ୍ନ⁻¹ ଲ⁻¹,ଯଥାକ୍ରମେ। ଏଲସାୟଦ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ।21ରିପୋର୍ଟ କରିଛନ୍ତି ଯେ ABTS ଅକ୍ସିଡେସନ ପାଇଁ Km ମୂଲ୍ୟ ଯଥାକ୍ରମେ 0.1 mM ଏବଂ 0.064 mM ଥିଲା, ଯାହା ABTS ପାଇଁ Lac A ଏବଂ Lac B ଆଇସୋଏନଜାଇମର ଉଚ୍ଚ ଆଫିନିଟି ସୂଚିତ କରେ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, Vmax ମୂଲ୍ୟ 0.182 μmol ଥିଲା।ସର୍ବନିମ୍ନ⁻¹ଏବଂ ୦.୬୦୩ μmolସର୍ବନିମ୍ନ⁻¹, ଯଥାକ୍ରମେ। ପ୍ରାପ୍ତ Km ମୂଲ୍ୟ Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM) ତୁଳନାରେ କମ୍ ଥିଲା; ଅଧିକନ୍ତୁ, ସେମାନଙ୍କର Vmax ମୂଲ୍ୟ (1429 mmol min⁻¹) ମଧ୍ୟ ଥିଲାତଳେଯେତେବେଳେ ABTS କୁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଉଥିଲା।33 ସେହିପରି, ଲେଣ୍ଟିନସ୍ ସ୍କ୍ବାରୋସୁଲସ୍ MR13 ଏବଂ ଟ୍ରାମେଟେସ୍ sp. AH28-2 ଲାକେସ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତାର Km ମୂଲ୍ୟ ଯଥାକ୍ରମେ 0.0714 mM ଏବଂ 0.025 mM ଥିଲା, ଏବଂ Vmax ମୂଲ୍ୟ 0.0091 mM min−1 ଏବଂ 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS ତୁଳନାରେ) ଥିଲା।, ଯଥାକ୍ରମେ।୫୬,୫୭
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ରୁ ଲାକେସର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ABTS ସାନ୍ଦ୍ରତାର ପ୍ରଭାବ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ABTS ସାନ୍ଦ୍ରତା ବନାମ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବେଗର ପାରସ୍ପରିକ ସମ୍ପର୍କର ଏକ ଲାଇନୱିଭର-ବର୍କ ପ୍ଲଟ୍ ପ୍ଲଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଗତିଜ ପାରାମିଟର (Vmax ଏବଂ Km) ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ABTS ର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା (0.025–3.0 mM) ଲାକେସର ଅକ୍ସିଡେସନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା pH 4.5 ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ମାଇକେଲିସ୍-ମେଣ୍ଟେନ୍ ଗତିଜ ସ୍ଥିରାଙ୍କଗୁଡ଼ିକୁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା ବନାମ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବେଗର ପାରସ୍ପରିକ ସମ୍ପର୍କର ଲାଇନୱିଭର-ବର୍କ ପ୍ଲଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ୍ ପ୍ରିଜମ୍ 6.01 ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଲାଇନୱିଭର-ବର୍କ ପ୍ଲଟ୍ ରୁ ଗତିଜ ସ୍ଥିରାଙ୍କ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା।
ପାରମ୍ପରିକ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ଏନଜାଇମ, ଯେପରିକି ପେକ୍ଟିନେଜ୍, ପେକ୍ଟିକ୍ ପଦାର୍ଥକୁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କରେ, ସାନ୍ଦ୍ରତା ଏବଂ ଅସ୍ଥିରତା ହ୍ରାସ କରେ। ସେମାନେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ସଂରଚନାତ୍ମକ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଭାଙ୍ଗି ଦିଅନ୍ତି ଏବଂ ପ୍ରାୟତଃ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଏନଜାଇମ, ଯେପରିକି ସେଲୁଲେସ୍ ଏବଂ ହେମିସେଲୁଲେସ୍ ସହିତ ମିଶ୍ରଣରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ସ୍ପଷ୍ଟତା ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ। ତଥାପି, ପେକ୍ଟିନେସ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରନ୍ତି ନାହିଁ, ଯାହା ଅସ୍ଥିରତା ଏବଂ ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ବ୍ରାଉନିଂର ମୁଖ୍ୟ ଯୋଗଦାନକାରୀ, ବିଶେଷକରି ସେଓ ଏବଂ ଅଙ୍ଗୁର ରସ ଭଳି ରସରେ।58ବିପରୀତରେ, ଲାକେସେସ୍ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ଅକ୍ସିଡେସନ୍କୁ ଉତ୍ପ୍ରେରିତ କରନ୍ତି, ସେମାନଙ୍କୁ ବୃହତ, ଅଦ୍ରବଣୀୟ ଅଣୁରେ ପଲିମରାଇଜ୍ କରନ୍ତି ଯାହାକୁ ଅବସାଦ କିମ୍ବା ଫିଲ୍ଟେରେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଅପସାରିତ କରାଯାଇପାରିବ। ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା କେବଳ ସ୍ପଷ୍ଟତାକୁ ଉନ୍ନତ କରେ ନାହିଁ ବରଂ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକ ଦ୍ୱାରା ହେଉଥିବା ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ବ୍ରାଉନିଂର ସମ୍ଭାବନାକୁ ହ୍ରାସ କରି ରସର ସେଲ୍ଫ ଲାଇଫ୍ ମଧ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି କରେ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଲାକେସ୍-ଆଧାରିତ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପ୍ରକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ହାଲୁକା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପରିସ୍ଥିତି (pH 3.5-5.5, ତାପମାତ୍ରା 25-40 °C) ଅଧୀନରେ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ସେମାନଙ୍କୁ ସେମାନଙ୍କର ପୁଷ୍ଟିକର କିମ୍ବା ଅର୍ଗାନୋଲେପ୍ଟିକ୍ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକୁ କ୍ଷତି ନକରି ନାଜୁକ ରସ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ କରିଥାଏ।59ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ପେକ୍ଟିନେଜ୍ ଚିକିତ୍ସା 1-2 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ରସକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ କରିପାରେ, ଯେତେବେଳେ ଲାକେସ୍ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ସାଧାରଣତଃ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ (3-6 ଘଣ୍ଟା) ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ। ତଥାପି, ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଏନଜାଇମକୁ ସ୍ଥିର କରି କିମ୍ବା ଯାନ୍ତ୍ରିକ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପଦ୍ଧତି ସହିତ ଲାକେସ୍ ମିଶ୍ରଣ କରି ଅନୁକୂଳ କରାଯାଇପାରିବ।60ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଅଶୋଧିତ ନିର୍ଯାସର ଏନଜାଇମ ପ୍ରୋଫାଇଲିଂ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଲାକେସ୍ ଏବଂ α-ଆମାଇଲେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ପେକ୍ଟିନେଜ୍ ଏବଂ ଜାଇଲାନେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅତ୍ୟନ୍ତ କମ୍ ଥିଲା, ଏବଂ ସେଲୁଲେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନଥିଲା। ତେଣୁ, ଟର୍ବିଡିଟି ଏବଂ ଫେନୋଲିକ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁରେ ହ୍ରାସ ମୁଖ୍ୟତଃ ଲାକେସ୍ ର କ୍ରିୟା ଯୋଗୁଁ ହୋଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଆଂଶିକ ଭାବରେ ଆମାଇଲେଜ୍ ର କ୍ରିୟା ଯୋଗୁଁ ହୋଇପାରେ।
ସାରଣୀ 1 ସଦ୍ୟ ଚିପି ହୋଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସ ଏବଂ ଲାକେସ୍-ପରିଶୋଧିତ ନମୁନାର ଭୌତିକ ରାସାୟନିକ ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ଦର୍ଶାଉଛି। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ସଦ୍ୟ ଚିପି ହୋଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସ (71.59%) ର ଅମଳ ଲାକେସ୍-ପରିଶୋଧିତ ନମୁନା (87.34%) ତୁଳନାରେ କମ୍ ଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ପିଲନିକ୍ ଏବଂ କମଳାର ନିଷ୍କର୍ଷ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ।61, ଯିଏ ସୂଚିତ କରିଥିଲେ ଯେ ଫଳ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣରେ ଏନଜାଇମର ବ୍ୟବହାର ରସ ଉତ୍ପାଦନ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ, ଫିଲ୍ଟେରେସନକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବ ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ରତା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ-ଗୁଣବତ୍ତା, ସ୍ୱଚ୍ଛ ରସ ପାଇପାରିବ। ରସ ଉତ୍ପାଦନରେ ବୃଦ୍ଧି ମୁଖ୍ୟତଃ ରସରେ ଦ୍ରବଣୀୟ ଶର୍କରାର ପରିମାଣ ବୃଦ୍ଧି ହେତୁ ହୋଇଥାଏ। ଫଳର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲିସିସ୍ ସମୟରେ, ଉତ୍ପାଦର କୋଷ କାନ୍ଥରେ ଥିବା ମେସୋଗ୍ଲିଆ ଏବଂ ପେକ୍ଟିନ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ ଏବଂ ନିରପେକ୍ଷ ଶର୍କରା ଏବଂ ଏସିଡ୍ ଭଳି ଦ୍ରବଣୀୟ ପଦାର୍ଥରେ ପରିଣତ ହୁଏ।୬୨।ଏନଜାଇମ-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସର pH ମୂଲ୍ୟ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (P < 0.05) ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ କମ୍ ଥିଲା, ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଉଭୟ ଗୋଷ୍ଠୀର pH ମୂଲ୍ୟ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 1)। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ମାର୍କ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟଙ୍କ ଫଳାଫଳ ସହିତ ସମାନ।63, ଯିଏ ଉଲ୍ଲେଖ କରିଥିଲେ ଯେ ତାପ ଚିକିତ୍ସା ପରେ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ କାଜୁ ଫଳ ରସର pH ହ୍ରାସ ପାଇଥାଏ। ଏନଜାଇମ ଚିକିତ୍ସା ପରେ ପେକ୍ଟିନ ଅବନତି ଏବଂ ଗାଲାକ୍ଟୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଗଠନ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ pH ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଦାୟୀ ହୋଇପାରେ। ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଏନଜାଇମ-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର pH 4.05 ଏବଂ 4.31 ମଧ୍ୟରେ ରହିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଅପରିଶୋଧିତ ଆପଲ୍ ରସର pH 4.12 ଏବଂ 4.33 ମଧ୍ୟରେ ଥିଲା।
ଅପରିଶୋଧିତ ଏବଂ ଲାକେସ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ନମୁନାର ମୋଟ ଅମ୍ଳତା (TA) ବୃଦ୍ଧି ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟ ସହିତ ହ୍ରାସ ପାଉଥିବା ଧାରା ଦେଖାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 1)। ଅମ୍ଳତା ହ୍ରାସ ପାଇଁ ଜୈବିକ ଏସିଡ୍ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ କିମ୍ବା ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଏବଂ ରସ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଅକ୍ସିଡେସନ ଦାୟୀ ଥିଲା।64ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଆପଲ୍ ରସ ଏବଂ ଏନଜାଇମ୍-ଚିକିତ୍ସା ନମୁନାର ମୋଟ ଏସିଡିଟି ଅନ୍ୟ ରସ (ଷ୍ଟ୍ରବେରୀ ରସ 0.9%, ପ୍ଲମ୍ ରସ 2.2%, କୁମକ୍ୱାଟ୍ ରସ 1.0%, ଆପ୍ରିକଟ୍ ରସ 2.4%, କମଳା ରସ 0.8%) ତୁଳନାରେ କମ୍ ଥିଲା, କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୟ ରସ (ଯଥା, ନାସପାତି ରସ 0.3%) ସହିତ ସମାନ ଥିଲା।62ଚିକିତ୍ସା ନକରି ସଦ୍ୟ ଚିପି ଦିଆଯାଇଥିବା ସେଓ ରସରେ ଏହି ପାର୍ଥକ୍ୟ ବିଭିନ୍ନ କାରଣ ଯେପରିକି ବଢ଼ୁଥିବା ଅବସ୍ଥା, ଜେନେଟିକ୍ କାରଣ, ପରିପକ୍ୱତା ସ୍ତର ଏବଂ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପଦ୍ଧତି ଯୋଗୁଁ ହୋଇପାରେ।65ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ଲାକେସ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସର ମୋଟ ଏସିଡିଟିରେ ହ୍ରାସ ସିଂହ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ଉପସ୍ଥାପିତ ଫଳାଫଳ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ।66୭୪ ଦିନ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ ଜିନ୍ ନୁଓ ଆପଲ୍ ରସରେ ମୋଟ ଏସିଡିଟି ହ୍ରାସ ସମ୍ପର୍କରେ। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ଓଶ୍ମିଆନ୍ସ୍କି ଏବଂ ୱଜ୍ଡିଲୋ67ପାରମ୍ପରିକ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପଦ୍ଧତିର ପ୍ରଭାବ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ସମୟରେ ସେଓ ରସର ଏସିଡିଟିରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପାଇଲେ ନାହିଁ।
ସାରଣୀ 1 ରେ ଉପସ୍ଥାପିତ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଲାକେସ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସର ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ କଠିନ (TSS) ମୂଲ୍ୟ ଅପରିଶୋଧିତ ନମୁନା ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଥିଲା। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରକାଶିତ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ।୬୮ଅଧିକନ୍ତୁ, ସାରଣୀ 1 ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଆପଲ୍ ରସ ଗୋଷ୍ଠୀର TSS ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସମୟ ବିନ୍ଦୁରେ 9.58 ଥିଲା ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ ଅବଧିର ଶେଷ ସୁଦ୍ଧା 11.05 ରେ ପହଞ୍ଚିଥିଲା। ଏହି ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ହମିଦ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ତାଜା ଆପଲ୍ ରସର TSS ମୂଲ୍ୟ ଅପେକ୍ଷା କମ୍।୬୯(11.2 ଏବଂ 11.80, ଯଥାକ୍ରମେ)। ଲାକେସ୍-ଟ୍ରିଟେଡ୍ ଆପଲ୍ ରସ ନମୁନାର TSS ମୂଲ୍ୟ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି, 11.23 ରୁ ଆରମ୍ଭ ହୋଇ 4°C ରେ ଦୁଇ ସପ୍ତାହ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ 12.93 ରେ ପହଞ୍ଚିଛି (ସାରଣୀ 1)। ସାଇଟ୍ରସ୍ ଫଳ, ଲେମ୍ବୁ ଏବଂ ମିଠା କମଳାରେ ମଧ୍ୟ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ TSS ରେ ସମାନ ବୃଦ୍ଧି ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଛି। ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ କଠିନ ପଦାର୍ଥ (TSS) ରେ ବୃଦ୍ଧି ପଲିସାକାରାଇଡ୍ (ଷ୍ଟାର୍ଚ୍) ର ମୋନୋସାକାରାଇଡ୍ (ଚିନି) ରେ ଜଳବିକରଣ, ରସ ଡିହାଇଡ୍ରେସନ୍ ଯୋଗୁଁ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ରସରେ ପେକ୍ଟିନର ଦ୍ରବଣୀୟ କଠିନ ପଦାର୍ଥରେ ଅବନତି ହେତୁ ହୋଇପାରେ। ମୋଟ ଦ୍ରବଣୀୟ କଠିନ ପଦାର୍ଥ (TSS) ରେ ବୃଦ୍ଧି ସମ୍ଭବତଃ ଦ୍ରବଣୀୟ ଶର୍କରାରେ ବୃଦ୍ଧି ହେତୁ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ଯଥାକ୍ରମେ ପେକ୍ଟିନ କିମ୍ବା ସେଲୁଲେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ପେକ୍ଟିନ କିମ୍ବା ସେଲୁଲୋଜ୍ ରୁ ଦ୍ରବଣୀୟ ଶର୍କରାରେ ରୂପାନ୍ତରିତ ହୋଇପାରେ, କିମ୍ବା ଷ୍ଟାର୍ଚ୍ଚର ଶର୍କରାରେ ଜଳବିକରଣ ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ ହୋଇପାରେ, ଯେପରି ହାମେଡ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ ରିପୋର୍ଟ କରିଛନ୍ତି।୬୯।ଲାକେସ୍ର ପ୍ରଭାବ ଆପଲ୍ ରସର ଗୁଣ ଉପରେ ଦୃଶ୍ୟମାନ ଭାବରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇପାରେ, କାରଣ ଲାକେସ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସ ଅପରିଶୋଧିତ ରସ ଅପେକ୍ଷା ଭଲ ପ୍ରବାହଶୀଳତା ଏବଂ କମ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। ଏହି ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ ସାରଣୀ 1 ରେ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଛି; ଏନଜାଇମ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ନମୁନାର ସାନ୍ଦ୍ରତା 1.87 cP ଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନାର ସାନ୍ଦ୍ରତା 2.95 cP ଥିଲା। ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଏହି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ହ୍ରାସ ସମ୍ଭବତଃ ପେକ୍ଟିନ୍ ପରି ପଦାର୍ଥର ଅଧିକ ଜଳଧାରଣ କ୍ଷମତା ଏବଂ ଏକ ସମନ୍ୱିତ ନେଟୱାର୍କ ଗଠନର ଗଠନ ଯୋଗୁଁ ହୋଇପାରେ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଏକ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋଫୋଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି 420 nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ମାପ କରି ଆପଲ୍ ରସ ବ୍ରାଉନିଂ ଇଣ୍ଡେକ୍ସ (BI) ଉପରେ ଲାକେସର ପ୍ରଭାବ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସାରଣୀ 1 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ, ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଉଭୟ ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଆପଲ୍ ରସ ନମୁନାର BI ଧୀରେ ଧୀରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଉଥିବା ଧାରା ଦେଖାଇଥିଲା। BI ବ୍ରାଉନିଂର ଡିଗ୍ରୀକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ ଏବଂ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣଏନଜାଇମେଟିକ୍ ଏବଂ ଅଣ-ଏନଜାଇମେଟିକ୍ ବ୍ରାଉନିଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ସୂଚକ। ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଶୋଷଣ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା (P < 0.05)। ସଂରକ୍ଷଣ ଶେଷରେ,ଏ୪୨୦ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ଏନଜାଇମ-ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଆପଲ୍ ରସ ନମୁନାର ମୂଲ୍ୟ ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାୟ 217% ଏବଂ 121% ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି (ସାରଣୀ 1)। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଏନଜାଇମ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ବ୍ରାଉନିଂ ଡିଗ୍ରୀକୁ ପ୍ରାୟ 56% ହ୍ରାସ କରିପାରିବ। ବେଜେରା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟଙ୍କ ଫଳାଫଳ।[19]] ଆମ ଫଳାଫଳ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ; ସେମାନେ ସେଓ ରସକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ କରିବା ପାଇଁ ଲାକେସ୍-ଗ୍ଲୁଟାରାଲଡିହାଇଡ୍-ନରିଆଲ ଫାଇବର ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ, ଯାହା ଏହାର ମୂଳ ରଙ୍ଗକୁ 61% ହ୍ରାସ କରିଥିଲା।
ଯଦିଓ ଫଳ ରସରେ ଥିବା ପଲିଫେନୋଲଗୁଡ଼ିକର ମାନବ ଶରୀର ଉପରେ ସକାରାତ୍ମକ ପୁଷ୍ଟିକର ଏବଂ ଚିକିତ୍ସାମୂଳକ ପ୍ରଭାବ ଥାଏ, ସେମାନେ ପ୍ରୋଟିନ ସହିତ ମଧ୍ୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରି ରସ ମେଘୁଆ, ଅବକ୍ଷେପଣ କିମ୍ବା ଅଳିଆ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରନ୍ତି, ଯାହା ଫଳରେ ଉତ୍ପାଦର ସ୍ୱାଦ ଏବଂ ସୁଗନ୍ଧ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୁଏ ଏବଂ ଏହାର ସେଲଫ ଲାଇଫ୍ ହ୍ରାସ ହୁଏ।71ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଥିଲା ପ୍ଲୁରୋଟସ୍ ଅଷ୍ଟ୍ରିଟସ୍ NRC 620 ରୁ ଲାକେସ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଆପଲ୍ ରସରେ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ପରିମାଣକୁ ସୁରକ୍ଷିତ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିବା। ସାରଣୀ 1 ରେ ଉପସ୍ଥାପିତ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଲାକେସ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସରେ ମୋଟ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ପରିମାଣ 4 °C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ ପୂର୍ବରୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ଉଭୟ ନମୁନାରେ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ମୋଟ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ପରିମାଣ ମଧ୍ୟ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 1)। ସାଣ୍ଡ୍ରି ଏଟ୍ ଅଲ୍ ଦ୍ୱାରା ଗବେଷଣା।72ଦେଖାଇଛି ଯେ ଏନଜାଇମ-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପୋଲ ରସ ଏହାର ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ପରିମାଣକୁ ବଜାୟ ରଖିପାରେ। ତଥାପି, ଲେଟେରା ଏଟ୍ ଅଲ୍ ଦ୍ୱାରା କରାଯାଇଥିବା ଏକ ଅଧ୍ୟୟନର ଫଳାଫଳ।73ଦେଖାନ୍ତୁ ଯେ କମଳା ରସକୁ ଫଙ୍ଗାଲ୍ ଲାକେସ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରିବା ଦ୍ୱାରା ଏଥିରେ ଥିବା ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ 45% ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହ୍ରାସ ପାଇପାରେ।
ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ମୁକ୍ତ ରାଡିକାଲ୍ ସ୍କାଭେଞ୍ଜିଂ, ସିଙ୍ଗଲେଟ୍ ଅମ୍ଳଜାନ ହ୍ରାସ ଏବଂ କ୍ୱେଞ୍ଚିଂ, ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପରମାଣୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଏବଂ ମୁକ୍ତ ରାଡିକାଲ୍ସକୁ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ଦାନ ଭଳି ଗୁଣ ଥିବା ଦେଖାଯାଇଛି, ଯାହା ସେମାନଙ୍କୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କରିଥାଏ।74ତେଣୁ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, 14 ଦିନ ପାଇଁ ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ରଖାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସରେ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଉପରେ ଲାକେସର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ DPPH ଏବଂ FRAP-ଆଧାରିତ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 2)। ଉଭୟ ପଦ୍ଧତି ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ବୃଦ୍ଧି ଦେଖାଇଥିଲା, ଯାହା ମୁକ୍ତ ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକ ବୃଦ୍ଧି କିମ୍ବା ମାଇଲାର୍ଡ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉତ୍ପାଦ (MRPs) ଗଠନ ହେତୁ ହୋଇପାରେ, ମାଇଲାର୍ଡ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବୃଦ୍ଧିର କାରଣ ହୋଇପାରେ।75ଅଣ-ଏନଜାଇମେଟିକ୍ ବ୍ରାଉନିଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (ଆସ୍କର୍ବିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍, ମେଲାର୍ଡ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ ଚିନିର ଏସିଡ୍-ଉତ୍ପ୍ରେରିତ ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍ ସମେତ) ବ୍ରାଉନିଂ ରଞ୍ଜକ (ମେଲାନୋଇଡିନ୍) ଉତ୍ପାଦନ କରେ। ମଧ୍ୟବର୍ତ୍ତୀ ଆସ୍କର୍ବିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍ ଉତ୍ପାଦ ଏବଂ ଚିନି ଡିଗ୍ରେଡେସନ୍ ଉତ୍ପାଦ (ଯେପରିକି କାର୍ବୋନିଲ୍ ଯୌଗିକ) ମେଲାର୍ଡ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମାଧ୍ୟମରେ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିପାରିବେ।76ଯଦିଓ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଫଳ ଏବଂ ପନିପରିବାର ବାଦାମୀ ରଙ୍ଗ ବିଷୟରେ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଛି, ତଥାପି ଏହି ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ ବିଷୟରେ ଆମର ବୁଝାମଣା ସୀମିତ ରହିଛି।77FRAP ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ, ଲାକେସ୍-ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା ଆପଲ୍ ରସ DPPH ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ କମ୍ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦେଖାଇଥିଲା (ସାରଣୀ 2), ଏବଂ ସମସ୍ତ ନମୁନାର ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବୃଦ୍ଧି ପାଇବା ସହିତ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା କାରଣ ସେମାନଙ୍କର ନୀତି ଭିନ୍ନ। DPPH ପଦ୍ଧତି ମୁକ୍ତ ରାଡିକାଲ୍ସକୁ ନିରପେକ୍ଷ କରିବାର କ୍ଷମତା ମାପ କରେ, ଯେତେବେଳେ FRAP ପଦ୍ଧତି ଲୁହା ଆୟନଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ରାସ କରିବାର କ୍ଷମତା ମାପ କରେ। ତେଣୁ, ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଭଲ ଭାବରେ ବୁଝିବା ପାଇଁ ଆଣ୍ଟିଅକ୍ସିଡାଣ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଏକାଧିକ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଛି।78
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଏକ ପ୍ରମୁଖ ନିଷ୍କର୍ଷ ହେଉଛି ଯେ *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 70°C ଏବଂ pH 3.0 ରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। ସାଧାରଣତଃ ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଅନ୍ୟ ଫଙ୍ଗାଲ ଲାକେସେସ୍, ଯେପରିକି *Trametes versicolor* ଏବଂ *Ganoderma lucidum* laccase, ତୁଳନାରେ *P. ostreatus* NRC 620 ଉଚ୍ଚ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ଏବଂ ଅଧିକ ଏସିଡିକ୍ pH ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। *Trametes versicolor* ଏବଂ *Ganoderma lucidum* ରୁ ଲାକେସେସ୍ ସାଧାରଣତଃ 50-60°C ରେଞ୍ଜରେ ଏବଂ 3.5 ଏବଂ 5.0 ମଧ୍ୟରେ pH ମୂଲ୍ୟରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। ଏହି ପାର୍ଥକ୍ୟ ଉନ୍ନତ ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ଦକ୍ଷତାରେ ଅବଦାନ ଦେଇପାରେ, ବିଶେଷକରି ଏସିଡିକ୍ ରସ ପାଇଁ ଯେଉଁଠାରେ ନିମ୍ନ pH ମୂଲ୍ୟରେ ସ୍ଥିରତା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। *P. ର ଅନନ୍ୟ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଅନ୍ୟ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ଫଙ୍ଗାଲ ଲାକେସେସ୍ ତୁଳନାରେ, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ଅଧିକ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜିଂ ପରିସ୍ଥିତିରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବାର କ୍ଷମତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ। ଏହାର ଅଧିକ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ତାପମାତ୍ରା ଶିଳ୍ପ ପ୍ରୟୋଗରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଲାଭ ସୂଚାଇଥାଏ, ଯେପରିକି ଦ୍ରୁତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ହାର ଏବଂ ହ୍ରାସିତ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ ପ୍ରଦୂଷଣ। ଏହାର କମ୍ pH, ଯାହା ଅନେକ ରସର ଅମ୍ଳୀୟ ପ୍ରକୃତି ସହିତ ଉପଯୁକ୍ତ, ରସ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଉପଯୋଗୀ ହୋଇପାରେ। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ବଡ଼ ପରିମାଣର ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ଅଧିକ ଅନୁସନ୍ଧାନକୁ ଯଥାର୍ଥ କରିଥାଏ, ଯାହା *Pleurotus ostreatus* NRC 620 କୁ ପାରମ୍ପରିକ ଫଙ୍ଗାଲ ଲାକେସ୍ ଉତ୍ସ ପାଇଁ ଏକ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ ବିକଳ୍ପ କରିଥାଏ। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ତୁଳନାରେ, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ ସର୍ବୋତ୍ତମ ତାପମାତ୍ରା 60°C ଏବଂ ସର୍ବୋତ୍ତମ pH 3.0। 80 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 60°C ରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରେ, *Ganoderma lucidum* ଲାକେସ୍ ବଜାୟ ରଖାଯାଏ।46କୁର୍ନିଆୱାତି ଏବଂ ନିସେଲଙ୍କ ମତରେ ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର %।7980, *ଗାନୋଡର୍ମା ଲୁସିଡମ୍* ଏନଜାଇମଗୁଡ଼ିକ 25°C ଏବଂ pH ମୂଲ୍ୟ 5.0 ରୁ 8.0 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଉତ୍କୃଷ୍ଟରୁ ମଧ୍ୟମ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରନ୍ତି, ଏବଂ pH 6.0 ଏବଂ 10 ରୁ 30°C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ତାପମାତ୍ରାରେ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରନ୍ତି। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ *ପ୍ଲେୟୁରୋଟସ୍ ଅଷ୍ଟ୍ରେଟସ୍* ପାଇଁ ଏନଜାଇମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ pH ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ଯଥାକ୍ରମେ 3.0 ଏବଂ 70°C ଥିଲା। ଦୁଇ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 40°C ଏବଂ 50°C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, ଏନଜାଇମ ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଯଥାକ୍ରମେ 68.33% ଏବଂ 59.61% ବଜାୟ ରଖିଥିଲା। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ପ୍ଲେୟୁରୋଟସ୍ ଅଷ୍ଟ୍ରେଟସ୍ NRC 620 ଲାକେସ୍ 50°C ରୁ 80°C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବିସ୍ତୃତ ତାପମାତ୍ରା ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା, ପ୍ରାୟ ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ (69%–98%) ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପହଞ୍ଚିଥିଲା, ସର୍ବାଧିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ 70°C ରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା।
ଶେଷରେ, ସ୍ଥିର ଅବସ୍ଥାରେ ପ୍ରାପ୍ତ ଓଏଷ୍ଟର ମସରୁମ୍ ଲାକେସ୍ NRC620, ବିଭିନ୍ନ pH ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ପରିସ୍ଥିତିରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା, ଅନ୍ୟ ଏନଜାଇମ୍ ଉତ୍ସ ତୁଳନାରେ ଉନ୍ନତ ସ୍ଥିରତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା। 10 mM MgSO₄ ଏବଂ CuSO₄ ଯୋଗ କରିବା ଦ୍ଵାରା ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରାୟ 21% ଏବଂ 35% ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ଯେତେବେଳେ ସେଓ ରସରେ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା, ସେତେବେଳେ ଏନଜାଇମ୍ pH ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ରତା ହ୍ରାସ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ସଂରକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଫେନୋଲିକ୍ ପରିମାଣ କେବଳ ସାମାନ୍ୟ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା।
ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଖାଦ୍ୟ ଶିଳ୍ପରେ, ବିଶେଷକରି ପାନୀୟ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣରେ ଲାକେସର ସମ୍ଭାବନାକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରେ। ବିଶେଷକରି ଫେନୋଲିକ୍ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକୁ ଭାଙ୍ଗିବା ଦ୍ୱାରା, ଲାକେସ କେବଳ ଅଳିଆ ହ୍ରାସ କରେ ନାହିଁ ଏବଂ ସ୍ପଷ୍ଟତାକୁ ଉନ୍ନତ କରେ ନାହିଁ ବରଂ ହାଲୁକା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଫଳ ରସର ଗୁଣବତ୍ତା ମଧ୍ୟ ବଜାୟ ରଖେ। ଜେଲେଟିନ୍, ବେଣ୍ଟୋନାଇଟ୍ ଏବଂ ସିଲିକା ଜେଲ୍ ପରି ପାରମ୍ପରିକ ସ୍ପଷ୍ଟୀକରଣ ଏଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକ ପରି, ଲାକେସ ଅପଚୟ ସୃଷ୍ଟି କରେ ନାହିଁ କିମ୍ବା ପାନୀୟରୁ ସୁଗନ୍ଧ ଦୂର କରେ ନାହିଁ, ଯାହା ଏହାକୁ ଏକ ଅଧିକ ପରିବେଶ ଅନୁକୂଳ ଏବଂ ସ୍ଥାୟୀ ବିକଳ୍ପ କରିଥାଏ। ଏହା ବ୍ୟତୀତ, ଅନ୍ୟ ଏନଜାଇମ ଏବଂ ଫିଲ୍ଟେରେସନ ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ, ଲାକେସ ଉତ୍ପାଦ ଗୁଣବତ୍ତା ସହିତ ଆପତ୍ତି ନକରି ଏକ ଲକ୍ଷ୍ୟଭେଦିତ ଏବଂ ମୂଲ୍ୟ-ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ସମାଧାନ ପ୍ରଦାନ କରେ।
କ୍ୟୋମୁହିମ୍ବୋ, ଏଚ୍ଡି ଏବଂ ବ୍ରିଙ୍କ୍, ଏଚ୍ଜି। ତମ୍ବା-ଧାରଣ କରିଥିବା ଲାକେସେସର ପ୍ରୟୋଗ ଏବଂ ସ୍ଥିରୀକରଣ ରଣନୀତି; ଏକ ସମୀକ୍ଷା। ହେଲିଅନ୍ 9, e13156 (2023)।
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଡିସେମ୍ବର-୧୫-୨୦୨୫